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重組蛋白表達(dá)之細(xì)胞轉(zhuǎn)染的原理及問題解析

發(fā)表時(shí)間:2024-05-10 訪問次數(shù):1003

  在重組蛋白表達(dá)時(shí),我們常常通過將外源基因?qū)氲郊?xì)胞內(nèi),讓其隨著細(xì)胞蛋白的表達(dá)而表達(dá),從而獲得目標(biāo)蛋白的方式。這個(gè)過程,我們稱之為細(xì)胞轉(zhuǎn)染。細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)現(xiàn)過程有很多,比如化學(xué)轉(zhuǎn)染法、物理轉(zhuǎn)染法、生物轉(zhuǎn)染法等等。可以說,細(xì)胞轉(zhuǎn)染是實(shí)現(xiàn)基因編輯、蛋白表達(dá)、信號(hào)傳導(dǎo)等一系列研究的重要方法。

重組蛋白表達(dá)

  細(xì)胞轉(zhuǎn)染現(xiàn)階段主要有兩種:穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染(關(guān)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的相關(guān)知識(shí)以及穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建的步驟,大家可以點(diǎn)擊“哺乳動(dòng)物蛋白表達(dá)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染之間有哪些不同?”查看)。

  細(xì)胞轉(zhuǎn)染的常見問題有哪些?

  1、哪些因素會(huì)影響到細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率

  質(zhì)粒。質(zhì)粒的選擇從直接上關(guān)系到轉(zhuǎn)染的效率,其濃度也會(huì)在極大程度上影響著轉(zhuǎn)染的效率(一般不要低于1000ng/uL);

  細(xì)胞。首先要保證所選是一個(gè)活性較高的細(xì)胞,對(duì)于不同的細(xì)胞來說,轉(zhuǎn)染方法和試劑的選擇不同,轉(zhuǎn)染的效率也會(huì)存在極大的差異;

  方法。按照說明書來選擇合適的轉(zhuǎn)染方法,并確定好最佳的轉(zhuǎn)染條件;

  2、細(xì)胞轉(zhuǎn)染無法提高轉(zhuǎn)染率要怎么解決

  當(dāng)出現(xiàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低的情況時(shí),可以選通過構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株的方式,或者通過藥物的加壓篩選來進(jìn)行,這樣一般都能解決轉(zhuǎn)染效率低的情況;

  3、怎么選擇合適的細(xì)胞轉(zhuǎn)染

  目前常用的轉(zhuǎn)染方法主要有物理轉(zhuǎn)染法以及化學(xué)試劑等轉(zhuǎn)染方法,但是也各具優(yōu)缺點(diǎn)。比如物理轉(zhuǎn)染法需要使用到一些昂貴的儀器,一般的實(shí)驗(yàn)室無法滿足這些要求;而化學(xué)轉(zhuǎn)染法使用相對(duì)更加廣泛,價(jià)格便宜、操作簡單,但是只能用于一些較為常規(guī)的細(xì)胞,對(duì)于一些個(gè)性化的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率則會(huì)相對(duì)低下;

  細(xì)胞轉(zhuǎn)染作為外源基因的引入方式,可以說在直接上關(guān)系著蛋白表達(dá)的效率或成功率,可以說是蛋白表達(dá)成功的第一步。所以,如何選擇載體并構(gòu)建好合適的轉(zhuǎn)染環(huán)境,在極大程度上制約著蛋白的表達(dá)。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供蛋白表達(dá)服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。

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