抗體是由高等生命形式的免疫系統(tǒng)中的B細胞制造的蛋白質(zhì)，作為一種適應性特征，使身體能夠處理對生物體構成威脅的入侵外來分子?？贵w的自然功能涉及它們附著在抗原（屬于入侵的異物）上，以標記它們被免疫系統(tǒng)破壞。
這種附著在特定分子上的天生傾向已經(jīng)確立了它們在科學研究中的用途。由于可以選擇已知會附著在某些抗原上的特異性抗體，因此研究人員可以使用抗體來識別某些物質(zhì)的存在。因此，在細胞蛋白質(zhì)功能的研究中，抗體的使用變得非常依賴。

科學家們已經(jīng)開發(fā)出許多利用抗體性質(zhì)來研究細胞和組織中蛋白質(zhì)的技術。免疫組織化學、免疫細胞化學、蛋白質(zhì)印跡、ELISA、流式細胞術和FACS以及ELISPOT等應用都是利用抗體的成熟方法。為了充分利用這些強大的研究技術，必須選擇適合特定應用的正確抗體，因此，為您的實驗研究選擇合適的抗體是第一步也是尤為重要的一步。

免疫組織化學具有低至中等通量，可用于固定細胞和組織，可以產(chǎn)生細胞定位，具有高空間分辨率，通常專注于單個蛋白質(zhì)，可以一次對多種蛋白質(zhì)進行成像，并且是定性和半定量的。

研究定位的另一種技術是免疫細胞化學。該技術具有低到高通量，可用于固定細胞和組織，可以產(chǎn)生亞細胞定位，可以一次對多種蛋白質(zhì)進行成像，并且是定性和半定量的。然而，其空間分辨率受到組織結構的限制。

蛋白質(zhì)印跡是研究蛋白質(zhì)濃度的合適技術。它具有低到中等通量，可用于細胞和組織裂解物，產(chǎn)生相對蛋白質(zhì)水平，可以建立分子量，亞型和翻譯后修飾，并且是半定量的。

ELISA是研究蛋白質(zhì)相互作用的合適技術。該方法具有中到高通量（96孔板），可用于研究血清/血漿，活或固定細胞和組織，它產(chǎn)生準確的蛋白質(zhì)水平，它是定量和定性的。

ELISA也可用于研究表達，其特征如上所述。流式細胞術和FACS是研究表達的替代技術。它具有從低到高通量（最多384孔板）。它可用于固定或活細胞，可以確定化學和物理性質(zhì)，如大小、表面標志物的表達等。它可用于定量和分選細胞（FACS）。最后，它是一種定量方法。

選擇一抗
選擇一抗時，必須考慮正確的類型，單克隆或多克隆。

單克隆抗體僅識別抗原上的單個表位，它們產(chǎn)生的背景噪音較小，因為它們不太可能與其他蛋白質(zhì)發(fā)生交叉反應。此外，它們的同質(zhì)性非常高，這意味著批次之間的變異性很低。它們在與相關分子混合物中的抗原結合方面也非常有效。然而，由于它們太具體，它們不能在各種物種中工作。它們也容易受到抗原化學處理的表位丟失的影響。

另一方面，多克隆抗體的特征如下：它們識別任何一種抗原上的多個表位，它們具有高親和力，可以幫助放大來自低表達蛋白的信號，它們更耐受抗原的微小變化，并且它們可用于檢測來自免疫原性以外的物種的蛋白質(zhì)。然而，缺點是它們?nèi)菀壮霈F(xiàn)批次間的差異，并可能產(chǎn)生背景信號。

選擇二抗
所使用的方法類型將告知哪種二抗是合適的。

-IHC：HRP或AP偶聯(lián)、片段、生物素化（親和素/鏈霉親和素與酶或熒光染料偶聯(lián)）、熒光染料（如AlexaFluor®、Cy染料、FITC®和PE）以及預吸附。
-ICC：片段抗體，生物素化（親和素/鏈霉親和素與熒光染料偶聯(lián)），熒光染料，FITC和PE，并預吸附。
-蛋白質(zhì)印跡：HRP或AP偶聯(lián)、生物素化（親和素/鏈霉親和素與酶偶聯(lián)）、熒光染料（Alexa680和Alexa790）、輕鏈特異性抗體VeriBlotforIP。
-ELISA和ELISPOT：HRP或AP偶聯(lián)，生物素化（親和素/鏈霉親和素與酶偶聯(lián)），單克?。ㄌ貏e是亞型特異性抗體，如抗IgG1）
-流式細胞術和FACS：熒光染料，Cy染料、FITC®和PE、生物素化（親和素/鏈霉親和素與熒光染料偶聯(lián)）、單克隆、F（ab'）2片段和偶聯(lián)一抗，可最大限度地提高時間效率。

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