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單克隆抗體純化的原理及其具體操作步驟盤點(diǎn)

發(fā)表時(shí)間:2023-08-11 訪問(wèn)次數(shù):824

  單克隆抗體制備后,我們都需要對(duì)所得抗體進(jìn)行相應(yīng)的純化工作,只有提純,才能讓減少抗體的雜質(zhì),并提升抗體的作用效果??梢哉f(shuō),抗體純化是抗體必不可少的過(guò)程。那么,您知道怎么做抗體純化嗎?抗體純化的具體操作步驟是怎樣的?今天普健生物就和大家具體聊聊。

  我們知道,抗體主要來(lái)源于血清,通過(guò)反復(fù)想動(dòng)物體內(nèi)注入抗原產(chǎn)生。然后,對(duì)血清進(jìn)行相關(guān)抗體的提取,這個(gè)過(guò)程就是抗體純化。

  抗體純化的原理:

  抗體純化的原理主要是根據(jù)蛋白的一些性質(zhì)不同,將其從混合液中提取出來(lái)的方式。比如利用蛋白分子大小不同、PH溶解值不同、溶解度不同、吸附性質(zhì)不同、生物親和力不同等一系列的手段,將其從溶液中提取出來(lái)的方式。

  抗體純化的具體步驟:

  1、蛋白提取

  通過(guò)手段破碎細(xì)胞,使得蛋白得以釋放出來(lái)。通常利用裂解緩沖液破碎細(xì)胞,而后通過(guò)離心等方法去除細(xì)胞碎片,再將蛋白從裂解液中溶解出來(lái);

  2、抗體富集

  通過(guò)層析的方式,使得抗體更集中。常見的方法有親和層析(利用抗體及其特異性之間的特異性結(jié)合)、離子交換層析(利用抗體與離子交換介質(zhì)之間的電荷相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)富集)、尺寸排除層析(根據(jù)分子大小差異,利用多孔介質(zhì)篩選);

  3、純化和濃縮

  通過(guò)透析膜將富集的抗體從介質(zhì)中洗脫出來(lái),并去除鹽離子等小分子雜質(zhì),之后在利用濃縮裝置,將目標(biāo)抗體濃縮到較小的體積;

  4、純化驗(yàn)證

  通過(guò)SDS-PAGE、Western blot等手段,驗(yàn)證抗體的分子量以及特異性結(jié)合的能力;

  總的來(lái)說(shuō),抗體純化是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程,我們需要結(jié)合抗體的具體情況選擇具體的純化方法,這樣不僅能節(jié)約大量的時(shí)間,而且能夠有效降低其成本投入。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供單克隆抗體純化服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來(lái)電咨詢。

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