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蛋白純化中出現(xiàn)析出問題的解決方案

發(fā)表時間:2022-08-02 訪問次數(shù):6373

  在蛋白純化的過程中,我們常常會遇到各種各樣的問題,有的是因為操作中出現(xiàn)問題導致,有的是因為生產(chǎn)環(huán)境變動導致,還有一些卻是正常的情況。當遇到這些問題的時候,我們可以根據(jù)日??偨Y(jié)的一些經(jīng)驗來進行相應的處理。今天,普健生物就和大家聊聊有關(guān)蛋白純化中出現(xiàn)沉淀的情況分析及其解決辦法。

  一般在遇到這種情況時,我們常常有兩種方法來予以處理。

  方法一:復溶沉淀蛋白。通過成倍地加入稀釋液來稀釋重懸蛋白,并加入終濃度為1.5M Nacl和100mlMDTT,搖晃5min后,所得結(jié)果就會好很多;

  這個方法能夠解決一部分蛋白洗脫后沉淀的問題,但是由于加入的Nacl和DTT,可能會對之后的實驗產(chǎn)生影響,所以需要采用透析法去除后才能繼續(xù)后續(xù)實驗;

  方法二:重新制備蛋白。何種方法為方法一的升級版,再添加緩沖液的時候,使用功能1M Nalc和10%的甘油,而后再通過離心的方式獲得上清液,最后再用10ml洗脫緩沖液重懸填料;

  總的來說,蛋白洗脫后沉淀的現(xiàn)象非常的常見,最主要的原因是蛋白的濃度過高,使得蛋白和蛋白之間相互作用的機會增多而形成蛋白聚合體。所以,一般這個時候我們可以考慮通過稀釋來處理。通常,我們可以考慮加入高濃度Nacl、高濃度DTT或甘油的方式來處理。普健生物為廣大用戶提供專業(yè)的蛋白純化服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。

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